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紀要論文 / Departmental Bulletin Paper(1) |
| 公開日 |
2005-01-01 |
| タイトル |
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タイトル |
犬および猫における貧血関連性感染症の遺伝子診断の臨床応用に関する研究 |
| タイトル |
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タイトル |
Clinical studies on molecular diagnosis in canine and feline infectious-disease related anemia |
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言語 |
en |
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言語 |
jpn |
| 資源タイプ |
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資源タイプ識別子 |
http://purl.org/coar/resource_type/c_6501 |
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資源タイプ |
departmental bulletin paper |
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内容記述タイプ |
Other |
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内容記述 |
P(論文) |
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内容記述タイプ |
Other |
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内容記述 |
特集 |
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内容記述タイプ |
Other |
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内容記述 |
FEATURE ARTICLES |
| 著者 |
山田, 隆紹
土屋, 亮
久末, 正晴
渡辺, 征
Yamada, Takatsugu
Tsuchiya, Ryo
Hisasue, Masaharu
Watanabe, Masashi
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| 所属機関 |
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麻布大学獣医学部内科学第二研究室 |
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麻布大学獣医学部内科学第二研究室 |
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麻布大学獣医学部内科学第二研究室 |
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麻布大学獣医学部内科学第二研究室 |
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Laboratory of Internal Medicine II, Azabu University, School of Veterinary Medicine |
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Laboratory of Internal Medicine II, Azabu University, School of Veterinary Medicine |
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Laboratory of Internal Medicine II, Azabu University, School of Veterinary Medicine |
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Laboratory of Internal Medicine II, Azabu University, School of Veterinary Medicine |
| 抄録 |
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内容記述タイプ |
Abstract |
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内容記述 |
イヌのバベシア症およびネコのマイコプラズマ症は,それぞれ貧血を発生させる感染性の疾患である。本邦では,これら疾患の病原体はバベシア症ではBabesia. gibsoni (B. gibsoni)で,マイコプラズマ症ではMycoplasma haemofelis(M. haemofelis)とされており,それぞれ赤血球に寄生し宿主に貧血を発生させる。診断は,主に末梢血血液塗抹における直接鏡検によって行われているが,極端に寄生率の低い時には確定診断を行うことがしばしば困難であり,またゴミなどの夾雑物との鑑別は難しい。我々は以前から簡便かつ高感度な検出法としてPCR法に着目し,その臨床応用に関する研究を行ってきた。M. haemofelisには,Ohio株(OH)とCalifomia株(CA)が存在することが知られており,それぞれの株の16SrRNAの塩基配列を基に個々の株を特異的に認識しうるプライマーを作製し,マイコプラズマ症疑いの症例の血液から得られたDNAを鋳型としてPCR反応を行った。その結果は,血液塗抹検査所見とすべて一致し,優れた検出系であることを報告している。本研究では,イヌのバベシア症におけるPCR法の有用性を評価するため,B. gibsoni感染が疑われた犬38症例についてEnzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)法による血中抗体価の測定と,Polymerase chain reaction (PCR)法を用いた遺伝子の検出による感染診断の比較検討を行った。その結果,ELISA法では38例中16例(42.1%)が感染陽性を示したのに対し,PCR法ではELISA陽性16例の他にELISA法により陰性であった11例を含む27例(71.1%)が陽性と判定された。PCR法で陽性の27例中4例では血液塗抹上で感染は確認できなかった。さらにPCR法では0.0003%の低い寄生赤血球率を持つ犬でも検出可能であった。以上のことからB. gibsoni自然感染症例の診断では,PCR法の方がELISA法および直接鏡検法よりも検出感度が高かった。そのためB. gibsoni感染において低寄生赤血球率の場合でもPCR法は有用な検査法であることが示唆された。また,猫のM. haemofelis感染および犬のB. gibsoni感染のPCR診断において,DNAの分離なしに全血から直接PCRを行うことを試み,従来のDNAからのPCRと同様な結果が得られるかどうか検討した。猫のM. haemofelis感染および犬B. gibsoni感染の全血にて,以前報告されているプロトコールに若干改変を行ない直接PCRを行なった。その結果,いずれの検体においてもDNAを鋳型とする従来のPCRと同じ結果が得られた。検出感度は,B. gibsoniでは0.08%寄生率,M. haemofelisのCA株感染では0.12%寄生率,OH株感染では0.26%寄生率において検出可能であった。本法は迅速性,簡便性,経済的であることからPCRの臨床応用に有用な方法であると考えられた。以上の研究の結果から,感染性の疾患の病原体を検出する方法としてPCR法が高感度な方法であることが明らかとなっただけでなく,直接PCR法が実用にむけての簡便なプロトコールの一つであることが示された。 |
| Abstract |
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内容記述タイプ |
Other |
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内容記述 |
Babesia. gibsoni (B. gibsoni) and Mycoplasma haemofelis (M. haemofelis) are defined as infectious agent which can infect the erythrocyte and induce anemia in dog and cat, respectively. Although, the definitive diagnosis has been performed by cytological examination in blood smear, it was often difficult to confirm since the examination was not sensitivity and specific. In the present study, 2 clinical studies were designed. Section 1, comparative investigation of B. gibsoni infection using the polymelase chain reaction (PCR) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) were performed on 38 dogs suspected of the infection. Sixteen out of 38 dogs (42.1%) were positive by ELISA, while 27 dogs (71.1%) were positive by PCR including 11 ELISA negative cases additional to the 16 ELISA-positive ones. The protozoa were not detected on blood smears from 4 of 27 PCR-positive cases. PCR method was able to detect the cases even with parasitemia as low as 0.0003% of the red blood cells. These results suggested that the PCR method may be more sensitive for detecting canine B. gibsoni infection than ELISA and direct microscopic examination. PCR, therefore, is thought to be an effective diagnostic method for the detection of B. gibsoni infection in a dog even with lowgrade parasitemia. However, the PCR method was indicated as high sensitive and specific examination to confirm protozoal disease, the technique have been complicated and clinical using was uncommon in veterinary field. Then, in the section 2, we established direct PCR method and estimated about sensitivity and specificity in many clinical cases. In our direct PCR method, small amount of blood sample is used as the template, which was not extract to DNA. The dog and cat's blood samples were analyzed by this direct PCR method to detect the B.gibsoni and M.haemofelis infection, respectively. The results of direct PCR method correlated closely with the other method described previously. The sensitivity were 0.08% parasitemia and 0.12-0.26% parasitemia in B.gibsoni and M.haemofelis infection, respectively. These results indicated that direct PCR method could progress to be fast, simple and economical, and then it would be useful to clinical using of molecular diagnosis. In the present study, it was demonstrated that PCR method would be high sensitive to detect the protozoal infectious disease and that direct PCR methods would be one of the simple analyzing protocol. |
| 書誌情報 |
麻布大学雑誌
en : Journal of Azabu University
巻 11/12,
p. 130-136,
発行日 2006-03-31
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| 出版者 |
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出版者 |
麻布大学 |
| Publisher |
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出版者 |
Azabu University |
| ISSN |
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収録物識別子タイプ |
ISSN |
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収録物識別子 |
1346-5880 |
| 書誌レコードID |
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収録物識別子タイプ |
NCID |
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収録物識別子 |
AA11561468 |
| 著者版フラグ |
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出版タイプ |
VoR |
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出版タイプResource |
http://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85 |
| text version |
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出版タイプ |
VoR |
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出版タイプResource |
http://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85 |
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内容記述タイプ |
Other |
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内容記述 |
application/pdf |
bull_jau_vol11-12-130.pdf (792.7 kB)
