@article{oai:az.repo.nii.ac.jp:00004427,
 author = {柏崎, 直巳 and 紫野, 正雄 and 猪股, 智夫 and Kashiwazaki, Naomi and Shino, Masao and Inomata, Tomoo},
 journal = {麻布大学雑誌, Journal of Azabu University},
 month = {Mar},
 note = {全身で蛍光タンパク質を発現するトランスジェニックラットの作製を目的とし,蛍光タンパク質遺伝子(EGFP,d2EGFP,DsRed)を前核期胚の前核へ注入(MI)し,注入胚をレシピエントヘ移植した。前核期胚のドナーとしては4-6週齢,交配用には12-36週齢,レシピエントとしては12-18週齢のWistar系ラットを用いた。eCGおよびhCG投与による過剰排卵処置した雌と成熟した雄を自然交配させ,hCG投与29時間後に卵管灌流により前核期胚を採取した。MIに用いた遺伝子コンストラクトは以下のように作製した。蛍光タンパク質遺伝子としては, EGFP,d2EGFP,DsRedを購入した。それぞれの蛍光タンパク質遺伝子の上流にCMV-IEプロモーター,下流にSV40ターミネーターを含んでいる。この様なプラスミドを構築し,導入遺伝子として増殖させた。これらをプロモーター上流の1箇所の制限酵素サイトで切断し,5mg/mlに調整してMIに用いた。前核期胚の雄性前核に蛍光タンパク質遺伝子(EGFP,d2EGFP,DsRed)をMIし,その16時間後に形態的に正常な1-2細胞期胚を偽妊娠誘起したレシピエントの卵管に移植した。えられた産子は離乳後,尾部組織よりゲノムDNAを抽出しPCR法により注入遺伝子の存在を調べた。DsRedを652個の胚にMIして11匹のレシピエントに卵管移植した結果,7匹が妊娠し,20匹の産子をえた。この産子のうち2匹がDsRed導入ラットであった。EGFPを241個の胚にMI後,5匹のレシピエントに移植した結果,2匹が妊娠し,9匹の産子がえられた。このうち2匹がEGFP導入ラットであった。また, d2EGFPを281個の胚にMIし,2匹のレシピエントに移植した結果,2匹が妊娠して7匹の産子がえられたが,H2EGFPが導入された産子はえられなかった。本研究により,全身で蛍光タンパク質遺伝子(EGFP,DsRed)の発現が期待されるトランスジェニックラットを作製することができた。これらのトランスジェニックラットは,様々な研究分野でのマーカーとして有望で,広範な分野での応用が期待される。, The objective of the present study was to generate transgenic rats carrying and expressing the fluorescent protein gene all over their body. Rat pronucleus stage embryos were microinjected with the transgenes (EGFP, d2EGFP, DsRed), then transferred into recipient female rats. Females aged at 4-6 weeks as embryo donors, at 12-18 weeks as embryo recipients, and males aged at 12-36 weeks for mating, were used in the present study. All the used rats were Wistar strain. Embryo donors were superovulated by injection of eCG and hCG, and naturally mated with matured males. Pronucleus stage embryos were collected from the donors at 29 hrs after the hCG injection. The gene constructs as transgenes were made as fellows. The fluorescent protein gene (EGFP, d2EGFP, DsRed), which were included the promoter of the CMV-IE and the terminator of the SV40, were purchased commercially. The DNA (5μg/ml) solution was prepared for microinjection. Pronucleus stage embryos were microinjected with the DNA solution. Morphological normal embryos selected among the embryos cultured for 16 hrs after microinjection were then transferred into recipient females that were mated with vasectomized male rats to induce pseudo-pregnancy. The extracted DNA from the tails of weaned pups was tested for the presence of the transgene by the PCR method. The 241, 28land 652 embryos injected with the EGFP, d2EGFP and DsRed, were transferred to the 5, 2 and 11 recipients, 2, 2 and 7 females of the recipients gave birth to 9, 7 and 20 new born pups. The 2, 0 and 2 pups of them were confirmed as transgenic founders. These results indicate that it can be generated that transgenic rats were expected expressing the fluorescent protein gene all over their body., P(論文), 特集, application/pdf, FEATURE ARTICLES},
 pages = {99--102},
 title = {全身で蛍光タンパク質を発現するトランスジェニックラット作出に関する研究},
 volume = {5/6},
 year = {2003}
}