{"created":"2023-06-19T07:18:28.384790+00:00","id":3842,"links":{},"metadata":{"_buckets":{"deposit":"1dcee564-1913-4383-956a-5e33e711b619"},"_deposit":{"created_by":4,"id":"3842","owners":[4],"pid":{"revision_id":0,"type":"depid","value":"3842"},"status":"published"},"_oai":{"id":"oai:az.repo.nii.ac.jp:00003842","sets":["370:193:375"]},"author_link":["17731"],"item_10006_date_granted_11":{"attribute_name":"学位授与年月日","attribute_value_mlt":[{"subitem_dategranted":"2001-03-20"}]},"item_10006_degree_grantor_9":{"attribute_name":"学位授与機関","attribute_value_mlt":[{"subitem_degreegrantor":[{"subitem_degreegrantor_name":"麻布大学"}]}]},"item_10006_degree_name_8":{"attribute_name":"学位名","attribute_value_mlt":[{"subitem_degreename":"博士(学術)"}]},"item_10006_description_7":{"attribute_name":"抄録","attribute_value_mlt":[{"subitem_description":"大腸菌などの病原性細菌によるヒトや動物の上皮細胞への付着については多くの共通性がみられ、哺乳動物など宿主の細胞表面の糖鎖をレセプターとして特異的に付着し増殖（定着）することによって感染症が引き起こされる。E. coliのもつType1線毛の先端には付着因子（アドヒジュンタンパク質）であるFimHが存在し、宿主の細胞表面に存在するマンノースをレセプターとして付着する。アドヒジュンタンパク質を欠損させたE. coliでは、付着性が著しく損なわれ、また感染症を発症しないことも知られることから、このタンパク質はE. coliが宿主の細胞へ付着し、感染するための重要な因子として研究されている。\n　一方、乳酸菌が哺乳動物など（宿主）の腸管上皮細胞に付着することは、種々報告されているが、その付着因子や付着強度などについての統一的な見解はほとんどみられない。乳酸菌をプロバイオティクスとして利用するために、宿主の細胞表面への付着性が重要となる。そこで明らかにされているE. coli由来FimHをコードしたfimH遺伝子（Klemm et al., 1987）を乳酸菌で発現させることにより、宿主の細胞表面への付着性を高めることが推測できる。また、病原性細菌と同じ付着因子を乳酸菌が産生することにより、病原性細菌の付着を競合阻害することが期待される。\n　本研究では、宿主細胞表面への乳酸菌の付着性向上および乳酸菌と病原性細菌との付着競合阻害を目的とし、E. coli由来Type1線毛のFimHを乳酸菌で産生させるために、Lactobacillus helveticus CP790株のプロティナーゼ（prtY）遺伝子（Yamamoto et al., 2000）を応用した。すなわち、prtY遺伝子はプロモーターを有し、菌体内で産生されたドメインであるタンパク質を菌体外へ放出させるシグナル配列と、そのタンパク質を菌体表層に固定するアンカー配列を含んでいる。グラム陽性・陰性菌のシャトルベクターでテトラサイクリン（Tc）耐性遺伝子をコードしたpHY300PLK（Takara）を用いてこのprtY遺伝子をサブクローニングし、prtY遺伝子のドメインにfimH遺伝子を組み込むことによって、FimHの機能をもつ融合タンパク質を産生させることを試みた。\n　第1章では、E. coliと乳酸菌の両者において融合タンパク質を産生させるためのプラスミドの構築を行なった。はじめにprtY遺伝子のプロモーター上流のシークエンスを決定し、プロモーターを含みPCR増幅したprtY遺伝子をpHY300PLKのBamH IとXba Iサイトに組み込み、pY790を構築した。次にpY790のprtY遺伝子内のSpe IとBpu1102 Iで切断されるドメイン（約800bp）を除去した後、両制限酵素サイト（配列中の下線部）を含むプライマー（フォワードプライマー ; 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